小鼠抗血清ELISA效價測定檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量

檢測血清的效價。

二、適用范圍

定量檢測動物血清的效價。

三、所需材料

儀器：微孔板酶標儀450 nm/630 nm、均質器、振蕩器、離心機、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：單道 1µL～10 µL、10 µL～100µL

多道 50µL～300µL

試劑：去離子水

小鼠抗血清ELISA效價測定檢測試劑盒說明書

五、 試劑盒組成

六、溶液配制

配液: 洗滌工作液

   用去離子水將20×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進行稀釋，用于酶標板的洗滌，洗滌工作液在4℃環境可保存一個月，用前一天取出回溫。

七、樣本前處理                                                   

樣本處理前須知：

① 處理完的樣品應及時進行下步檢測，實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。

② 樣本數目超過8個時推薦使用排槍加樣。

血清（稀釋倍數：1000、2000、5000、10000）

① 取血清按以上稀釋倍數依次稀釋1000、2000、5000、10000倍混勻；

② 取100μL用于分析。

八、 酶標免疫測定程序

① 將所有所需試劑從冷藏環境中取出，待其*回升至室溫后方可使用，根據體積大小不同取出回溫的時間從1小時~2小時。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

②  按標血清稀釋液和樣品雙孔平行的數量使用微孔。

③  加血清稀釋液/血清：加血清稀釋液/血清100µL 到對應的微孔中，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環境中反應30min。

④  洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，

加入洗滌工作液300 µL/孔，每次靜置20s，甩去孔內液體，重復洗滌3次，最后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。

⑤ 加酶標物：加入酶標物100 µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光孵育30 min。

⑥ .甩干孔內液體，重復洗板3次，最后一次用吸水紙拍干。

⑦ 顯色：加入底物液A液50 µL/孔，再加底物    

液B液50 µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環境中反應10min。

⑧ 測定：加入終止液50µL/孔，用酶標儀立即  測定450/630nm處的吸光度值。

九、 結果判定

以OD值≥1.0為標準。

血清稀釋倍數≤2000倍OD值≥1.0的判斷為低效價，血清稀釋倍數在2000~5000倍OD值≥1.0的為中等效價，血清稀釋倍數在≥5000倍OD值≥1.0的為高等效價（詳見試劑盒專業分析軟件，以便進行大量樣本的分析計算。）

十、 注意事項

① 根據體積大小不同取出回溫的時間從1小時~3                                                          小時，體積15毫升以上的優先從冷藏環境取出 回溫。

②  洗板拍干后應立即進行下一步操作。

③ 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

④不使用過了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號的試劑。

⑤ 0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。

⑥ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為10min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到15-20min，反之則減短反應時間。

⑦ 底物液B液長期使用變為淺藍色時，請放心使用，不影響檢測結果。

⑧ 未提及樣本請致電本公司技術服務部。

十一、貯藏條件及保存期

    貯藏條件： 2～8℃

保 質 期： 12個月

十二、問題與對策      

（見下頁）